白介素27ELISA試劑盒是一種用于定量檢測樣本中IL-27濃度的試劑盒,基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術。其原理是將特異性抗體包被在微孔板(或酶標板)上,加入標準品或待測樣本,樣本中的IL-27會與包被抗體結(jié)合。然后加入生物素化抗體,該抗體會與已結(jié)合的IL-27發(fā)生特異性結(jié)合。接著加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的鏈霉親和素,生物素與鏈霉親和素會發(fā)生高強度的非共價結(jié)合。最后加入顯色劑底物TMB,若反應孔中存在IL-27,則HRP會使無色TMB變成藍色物質(zhì),加入終止液后反應孔會變成黃色。在特定波長下測定反應孔的吸光度(OD值),樣本中的IL-27濃度與OD值成正比,通過繪制標準曲線即可計算出樣本中IL-27的濃度。
一、溫度控制
核心組分:如標準品、檢測溶液A/B、96孔板等,需立即保存于-20℃或更低的溫度下,以防止蛋白質(zhì)變性或降解。
其他試劑:如洗滌液、終止液等,建議保存在4℃的冰箱中,避免冷凍。
特殊說明:嚴禁冷凍含甘油或酶標抗體的組分,這可能導致蛋白變性,影響試劑性能。
二、避光防潮
避光保存:所有試劑需避光保存,尤其是HRP標記物和TMB底物。這些試劑對光敏感,長時間暴露于光線下可能導致其活性降低或失效。建議使用鋁箔包裹或棕色瓶存放。
防潮處理:確保試劑容器密封良好,防止?jié)駳膺M入。濕氣可能導致試劑降解和損壞,影響實驗結(jié)果。在南方高濕地區(qū),建議在試劑盒保存罐內(nèi)放置變色硅膠干燥劑,當指示劑由藍變粉時需立即更換。
三、特殊成分特殊保存
標準品:部分標準品可能需要避光或在-20℃以下保存,應嚴格按說明書要求操作。
分裝保存:對于頻繁使用的試劑盒,建議將酶標物按單次用量分裝至0.5mL離心管中,使用封口膜密封管口后置于-20℃避光保存。分裝前需對工作臺進行紫外線消毒,操作全程佩戴低溫防護手套,避免反復凍融導致蛋白聚合。
四、確保包裝完整
保存前要確認試劑盒包裝完好無損,若包裝有破損、密封不嚴,應及時更換包裝或采取密封措施,防止試劑污染或變質(zhì)。
五、使用前準備
回溫處理:實驗前,將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出,在室溫下平衡15-30分鐘后再使用。這有助于確保試劑溫度與室溫一致,避免因溫度差異影響實驗結(jié)果。
梯度解凍:對于冷凍保存的試劑,應采用梯度解凍的方法。例如,將分裝管置于4℃冰箱梯度解凍12小時,禁止室溫快速解凍。解凍后的酶標物需在24小時內(nèi)使用完畢,未用完部分應當廢棄。
